|
|
In planta produkce nanočástic specifické délky s použitím RNA a obalového proteinu Viru tabákové mozaiky (TMV)
Dlabalová, Lucie ; Moravec, Tomáš (vedoucí práce) ; Šafářová, Dana (oponent)
Virus tabákové mozaiky je jedním z vůbec nejprozkoumanějších virů, jeho vlastnosti a struktura jsou plně známy. Z tohoto důvodu byl v této práci vybrán jako biotemplát pro tvorbu nanočástice nastavitelné délky. Pokud je za fyziologických podmínek přítomna jak virová RNA, tak obalový protein, částice jsou schopny se samouspořádat a jejich délka je závislá na délce balené RNA. Podmínkou přednostního balení virové RNA je přítomnost enkapsidačního signálu, který byl identifikován již v 80. letech. V této práci jsme vytvořili dvoukomponentový systém, kdy byly rostliny Nicotiana bentamiana infikovány defektní RNA (dRNA) určenou k zabalení a RNA pomocného viru poskytující všechny komponenty nutné pro replikaci a balení dRNA. V RNA pomocného viru byl navíc vyřazen enkapsidační signál, aby nedocházelo k balení nesprávně dlouhých částic. Některé námi vytvořené pomocné viry navíc obsahovaly obalový protein modifikovaný v oblasti vnitřního kanálu částice. Tato modifikace by měla v budoucnu umožnit specifické vyplnění částic kovem. V rámci práce bylo připraveno několik variant jak dRNA, tak i pomocných virů, aby bylo možné identifikovat jednotlivé oblasti důležité pro replikaci, stabilitu a enkapsidaci vznikajících nanočástic. U rostlin infikovaných jednotlivými systémy jsme poté zjišťovali hlavně to, zda došlo...
|
|
|
Interakce virové RNA s kapsidovým proteinem v prostředí in vivo a biotechnologické využití vzniklých částic
Kratochvílová, Kateřina ; Moravec, Tomáš (vedoucí práce) ; Hála, Michal (oponent)
Virus tabákové mozaiky (TMV) je jednoduchý a široce používaný modelový virus, který je zkoumán již více než 130 let. Díky intenzivnímu studiu tohoto viru dnes známe podrobnosti z jeho infekčního cyklu, známe genom i strukturu vytvořené virové částice a stejně tak i mechanismus její tvorby. Proces tvorby virové částice (enkapsidace) je uspokojivě popsán v in vitro podmínkách. V in vitro podmínkách byl identifikován počátek sbalování částice (OAS, origin of assembly), nacházející se uvnitř genu pro pohybový protein (MP, movement protein). Pro vznik částic byl také předpokládán význam replikačních center tzv. replikačních továren. Cílem diplomové práce bylo studium specifičnosti interakce RNA a kapsidového proteinu při tvorbě částic přímo v rostlinách. Experimenty měly za cíl ověřit nutnost přítomnosti sekvence OAS při iniciaci virové enkapsidace, a také vliv buněčné kompartmentace na tento proces. Pomocí několika virových systémů (viru tabákové mozaiky, X viru bramboru, viru žluté zakrslosti fazolu a viru mozaiky vigny), byly vytvořeny genové konstrukty, umožňující tuto problematiku studovat na molekulární úrovni. Výsledky ukázaly, že interakce RNA s kapsidovým proteinem je specifická. Ke vziku částic docházelo pouze při interakci virové RNA s kapsidovým proteinem (CP, capsid protein) dříve...
|
|
|
In planta produkce nanočástic specifické délky s použitím RNA a obalového proteinu Viru tabákové mozaiky (TMV)
Dlabalová, Lucie ; Moravec, Tomáš (vedoucí práce) ; Šafářová, Dana (oponent)
Virus tabákové mozaiky je jedním z vůbec nejprozkoumanějších virů, jeho vlastnosti a struktura jsou plně známy. Z tohoto důvodu byl v této práci vybrán jako biotemplát pro tvorbu nanočástice nastavitelné délky. Pokud je za fyziologických podmínek přítomna jak virová RNA, tak obalový protein, částice jsou schopny se samouspořádat a jejich délka je závislá na délce balené RNA. Podmínkou přednostního balení virové RNA je přítomnost enkapsidačního signálu, který byl identifikován již v 80. letech. V této práci jsme vytvořili dvoukomponentový systém, kdy byly rostliny Nicotiana bentamiana infikovány defektní RNA (dRNA) určenou k zabalení a RNA pomocného viru poskytující všechny komponenty nutné pro replikaci a balení dRNA. V RNA pomocného viru byl navíc vyřazen enkapsidační signál, aby nedocházelo k balení nesprávně dlouhých částic. Některé námi vytvořené pomocné viry navíc obsahovaly obalový protein modifikovaný v oblasti vnitřního kanálu částice. Tato modifikace by měla v budoucnu umožnit specifické vyplnění částic kovem. V rámci práce bylo připraveno několik variant jak dRNA, tak i pomocných virů, aby bylo možné identifikovat jednotlivé oblasti důležité pro replikaci, stabilitu a enkapsidaci vznikajících nanočástic. U rostlin infikovaných jednotlivými systémy jsme poté zjišťovali hlavně to, zda došlo...
|
host ::
RSS.